本公司最新开发HRP标记生物分子试剂盒，直接将HPR共价键标记在目的分子上，用于后续生物学实验。

产品货号：BMHRP-SJH-5

产品名称：HRP快速标记试剂盒

原理与应用：高碘酸钠氧化法活化辣根过氧化物酶（HRP）的糖基，其带有醛基可以与待标记分子的氨基发生希夫碱反应（Schiff's base reaction），形成共价键，将HRP标记在待标记分子上。本试剂盒适用于带有氨基的目标分子的标记，比如：带有氨基的生物分子，蛋白或者抗体等。

试剂盒组成：

操作步骤：

首先去除待标记抗体或蛋白中的甘油、叠氮钠、以及含有氨基的缓冲成分物质，比如甘氨酸、Tris 等，还有EDTA等物质，可采用透析和超滤的办法置换缓冲液，以去除干扰物质达到**标记效果！透析或超滤缓冲液首选0.01M CB,PH:9.6缓冲液(说明书附件有经验配方无需调整PH），若实验室没有碳酸盐试剂再采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）透析或超滤置换缓冲液，最后调整抗体或蛋白的浓度到2MG/ML。如果抗体和蛋白不含上述这些干扰物质可以直接用上述CB或PBS缓冲液调整浓度到2MG/ML备用。

从-20℃取出HRP标记试剂盒，室温条件下或25-30℃温箱平衡30分钟左右，使各组分充分解冻后混匀。

取500ul抗体或蛋白（约1mg），加入一只预活化HRP(1mg)冻干粉中，用移液枪反复吹打几次溶解HRP，溶解后加入HRP标记启动液80ul继续混匀数次，避免产生气泡。最后室温避光或25-30℃温箱偶联反应2小时左右，若遇快要下班也可4℃反应24小时。

偶联结束将反应终止液粉管中加入1mL去离子水混匀，取50ul加入3所述反应液中，充分混匀，室温放置1 小时或者4℃2小时。

终止完成后，可直接加入等体积的标记物保存液，充分混匀，置于-20℃保存。如果想更上长期的保存建议先用0.067M PBS   PH:7.0（说明书附件有经验配方）透析或超滤置换缓冲液后再加标记物保存液。这样可以保存3年左右甚至更长。

注意事项：

待标记物成分过于复杂以及含有氨基小分子的初始缓冲液必须置换掉首选0.01M CB,PH:9.6缓冲液

如果待标记蛋白分子量小于40KD建议1mg使用2支HRP(1mg)，如果分子量小于20KD，建议1mg使用4支HRP(1mg)，相应标记启动液加2X80ul,或4X80ul即可。

小分子药物不建议直接标记HRP，因为HRP的结构不能结合足够的药物会造成效价偏低，这种情况建议先偶联BSA再进行HRP标记，这样效果会非常好。

如果待标记物含有其它蛋白需要把无关蛋白同样计算进去，尽快如此也请您慎重选择这样的样品进行标记。

缓冲试剂配制：

1、0.01M   CB ，PH:9.6缓冲液配制：取NaHCO3, 0.67g和Na2CO3, 0.21g加水到1L溶解完全即可，不用调节PH。

2、0.067M PBS,   PH:7.0缓冲液配制：取NaH2PO4.2H2O，5.35g和Na2HPO4.12H2O, 11.7g以及NaCL，9g加水1L溶解完全，最后添加NaOH，0.35g再次混匀后即可，不用再调节PH。