★ BioMag-SA 链霉亲和素包被磁珠
一、概述：
无锡百迈格生物科技有限公司研发的链霉亲和素磁珠由超顺磁亲水高分子微粒与高纯度链霉亲和素共价结合而成。可简便、快捷、有效地结合分离许多生物素化的配体，如生物素标记的抗体、蛋白酶、核酸或其他生物素标记的靶分子，这种链亲和素-生物素的高亲和力在许多生物学实验中有着广范的应用，链霉亲和素与磁珠结合后，使得对于生物素化样品的捕获、漂洗及检测等流程操作过程更加简便，体系优化后更容易及适用于大规模多样品自动化操作。
二、产品规格：
配体 | 链霉亲和素蛋白 |
磁珠表层材料 | 亲水高分子聚合物/二氧化硅 |
粒径大小 | 100nm/300nm/1μm/1.5μm/2.8μm/4μm/其他粒径定做 |
包装 | 1ml/5ml/10ml/ 100ml/其他 |
浓度 | 10mg/ml |
结合量（每毫克磁珠） | ﹥2900pmol游离生物素 ﹥420pmol 生物素标记的单链寡核苷 ﹥21μg 生物素化IgG |
批间差 | 5% |
沉降系数 | 3-6s |
| 建议用量 | 推荐每次取0.3-0.5mg磁珠 |
批次稳定性 | <5% |
| 保质期 | 两年 |
保存 | 2-8℃，禁止冷冻，使用前请充分混匀 |
电镜图 |  
|
三、通用使用方法
1 . 取适量磁珠（推荐每次取0.3-0.5mg磁珠，用户可根据样品种类及需求调整使用量）加入待反应样品，室温振荡反应10-30分钟后（反应时间根据生物素化分子 的大小及空间结构的复杂性可适当延长），置于磁力架上进行磁分离，弃上清，并用上样缓冲液重复淋洗3次。
2 . 链霉亲和素和生物素结合非常迅速，且结合后不受pH，温度，有机溶剂和其他变性剂的影响。下表列出了常用链霉亲和素和生物素的解离办法及效率（基于游离生物素，与偶联复合物的生物素数据有明显差异），用户也可根据自己样品的需求自行设定洗脱方式。
注意：由于磁珠保存液中含有减少非特异性结合的组分，在免疫诊断化学发光实验中可以直接将磁珠加入样品中使用，如果其他实验，也可以将磁珠使用前用样品缓冲液淋洗磁珠3-5次，再加入到样品中使用。
表1.洗脱条件参照表
洗脱温度和时间 | 洗脱溶液 | 洗脱效率 |
90°C for 10 min | 10 mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺 | 96.8% |
90°C for 5 min | 10 mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺 | 96.4% |
90°C for 2 min | 10 mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺 | 96.8% |
65°C for 5 min | 10 mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺 | 96.4% |
65°C for 2 min | 10 mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺 | 97.9% |
37°C for 10 min | 10 mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺 | 41.9% |
90°C for 10 min | H2O | 7.3% |
90°C for 10 min | 10 mM EDTA pH 8.2 | 52.0% |
90°C for 10 min | 95% 甲酰胺 | 35.9% |
90°C for 10 min | 30 mM NaOAc pH 9 and 95% 甲酰胺 | 95.5% |
90°C for 10 min | 80 mM NaOAc pH 9 and 95% 甲酰胺 | 97.3% |
90°C for 10 min | 140 mM NaOAc pH 9 and 95% 甲酰胺 | 95.4% |
洗脱后的样品客户可根据需求采用适当方法检测。
四、实验实例
4.1 链霉亲和素磁珠从总RNA中提取mRNA的方法
4.1.1 用户需自行准备的实验材料
4.1.1.1 无核糖酸酶的柠檬酸钠缓冲液：20×SSC（87.7g NaCl，44.1g 二水柠檬酸三钠定 容至500ml pH 7.2），0.5×SSC和0.1×SSC；
4.1.1.2 可加热至65℃的水浴锅或是其他加热仪器；
4.1.1.3 高压灭过菌的RNase-Free的1.5ml 和200μl离心管；
4.1.1.4 灭过菌的RNase-Free的移液枪和枪头；
4.1.1.5 生物素化的胸腺嘌呤寡聚体（Oligo dT）引物
4.1.1.6 无核糖核酸酶的去离子水
4.1.2 与引物退火
4.1.2.1取0.1-1mg 的总RNA样品加入到无菌、无RNase的1.5ml 离心管中，加入无菌去离子水至终体积为500μl；（注：总RNA量可低至50μg，但是mRNA提取量无法保证）
4.1.2.2 将1.2.1样品管至于65°C温浴10min；
4.1.2.3 加入5μl的生物素化的Oligo dT和13μl的20X SSC到总RNA样品中，温和混匀， 室温放置至完全冷却，这一步需要10min 左右。
4.1.3 预处理链霉亲和素磁珠。
4.1.3.1 将链霉亲和素磁珠充分混匀后，取适量磁珠于1.5ml无菌、无RNase的离心管内，放在磁力架上，待磁液分离后，移除上清。
4.1.3.2 采用1ml 0.5X SSC洗涤磁珠,放在磁力架上磁液分离，移除上清，重复两次。
4.1.3.3 加100μl 0.5X SSC 重悬链霉亲和素磁珠。
4.1.4 捕获洗涤mRNA与OligodT 复合物
4.1.4.1 将4.1.2.3步得到的复合物混合液加入到已经洗好且重悬的链霉亲和素磁珠中；
4.1.4.2 室温放置10min，期间每隔1-2min用移液枪轻柔混匀吹打以防磁珠出现沉降现象；
4.1.4.3 放于磁力架，磁液分离后小心移除上清，过程中不要触碰到磁珠，该步上清在确定mRNA已经结合并洗脱后再弃掉；
4.1.4.4 用移液枪加入300μl 0.1X SSC，温和吹打或是轻弹洗涤磁珠放于磁力架，磁液分离后小心移除上清，重复三次，最后一步洗涤后尽可能移除所有上清液。
4.1.5 mRNA洗脱
4.1.5.1 加入100μl洗脱液（无RNase水），温和吹打或轻弹离心管使磁珠和洗脱液充分混匀。
4.1.5.2 放于65℃水浴2分钟。
4.1.5.3 放于磁力架上，磁液分离后，小心将上清转移到一新的无RNase 离心管内，不要触碰到磁珠；（注：如果在转移过程中将磁珠悬起可将样品管置回磁力架上重新吸取上清）
4.1.6 磁珠法回收洗脱液中的mRNA。
五、产品信息：
引用文献：
●Self-assembled poly-HRP dual signal amplification strategy for highsensitive detection of circulating miR-142-3p in human serum；Sensors & Actuators: B. Chemical 279 (2019) 440–446
● Dual signal amplification strategy for high-sensitivity detection of copper species inbio-samples with a tunable dynamic range.Chemical Communications (Cambridge, England) [01 Mar 2018, 54(20):2542-2545]
● Magnetic-assisted self-assembled aptamer/protein hybrid probes for efficient capture and rapid detection of cancer cells in whole blood.Talanta.2019 Dec 1;205:120129. doi: 10.1016/j.talanta.2019.120129. Epub 2019 Jul 8
● a novel cell-assisted enhanced chemiluminescence strategy for rapid and label-free detection of tumor cells in whole blood.[2020][acs sens](DOI:10.1021/acssensors.9b02140)
● Building an anti-interfering DNAzyme-powered micromachine resistant to being inhibited by biological matrices. Chemical Communications 2020, 56 (17), 2658-2661.
● A digital immuno-PCR assay for simultaneous determination of 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine in human serum
https://doi.org/10.1016/j.aca.2021.339321
●Universal DNAzyme Walkers-Triggered CRISPR Cas12a/Cas13a Bioassay for the Synchronous Detection of Two Exosomal Proteins and Its Application in Intelligent Diagnosis of Cancer
