★ Mag-SA 链霉亲和素包被磁珠
一、概述:
链霉亲和素磁珠由超顺磁亲水高分子微粒与高纯度链霉亲和素共价结合而成。可简便、快捷、有效地结合分离许多生物素化的配体,如生物素标记的抗体、蛋白酶、核酸或其他生物素标记的靶分子,这种链亲和素-生物素的高亲和力在许多生物学实验中有着广范的应用,链霉亲和素与磁珠结合后,使得对于生物素化样品的捕获、漂洗及检测等流程操作过程更加简便,体系优化后更容易及适用于大规模多样品自动化操作。
二、产品规格:
配体 | 链霉亲和素蛋白 |
磁珠表层材料 | 亲水高分子聚合物 |
粒径大小 | 100nm/300nm/1μm/1.5μm/2.8μm/4μm/定做 |
包装 | 1ml 5ml 10ml 50ml 100ml |
浓度 | 10mg/ml |
结合量(每毫克) | ﹥2900pmol游离生物素 ﹥420pmol 生物素标记的单链寡核苷酸 ﹥21μg 生物素化IgG |
建议pH使用范围 | 2-10 |
沉降系数 | 3-6s |
免疫化学发光检测曲线相关R值 | >0.99000 |
批次稳定性 | <5% |
化学发光免疫诊断建议使用量 | 20-50μL(管式,工作浓度2mg/ml) 10-30μL(板式,工作浓度1mg/ml) |
保存 | 2-8℃,禁止冷冻,使用前请充分混匀 |
电镜图 | |
三、偶联工艺改进后对比测试(ALP检测体系数据,所以背景值会略高)
磁珠批号 | | 批号:60703(300nm)老工艺 | 批号:70302-3(300nm)新工艺 |
名称 | 赋值 | RLU | RLU |
A | 0 | 18669 | 17491 |
B | 0.15 | 98176 | 121613 |
C | 0.5 | 559957 | 566314 |
D | 1.5 | 1660965 | 1612746 |
E | 5 | 5057777 | 5305927 |
F | 40 | 13578857 | 13922888 |
B/A | | 5.26 | 6.95 |
F/A | | 727.35 | 796.00 |
以上数据为百迈格生物300nm链霉亲和素磁珠工艺优化前后的对比测试数据,为全自动化学发光原始数据,未经允许,严禁转载使用(货号:BMSA300-2) |
四、沉降实验
沉降时间 | 磁珠(2mg/ml) |
体积 | 30ul | 15ul | 60ul |
进口磁珠 | 3 | 3 | 3 | 2 | 3 | 2 | 3 | 4 | 4 |
average | 3.0 | 2.3 | 3.7 |
自有磁珠 | 5 | 4 | 5 | 4 | 3 | 3 | 5 | 5 | 4 |
average | 4.7 | 3.3 | 4.7 |
五、通用使用方法
1 .取适量磁珠(推荐每次取0.3-0.5mg磁珠,用户可根据样品种类及需求调整使用量)加入待反应样品,室温振荡反应10-30分钟后(反应时间根据生物素化分子 的大小及空间结构的复杂性可适当延长),置于磁力架上进行磁分离,弃上清,并用上样缓冲液重复淋洗3次。
2 . 链霉亲和素和生物素结合非常迅速,且结合后不受pH,温度,有机溶剂和其他变性剂的影响。下表列出了常用链霉亲和素和生物素的解离办法及效率(基于游离生物素,与偶联复合物的生物素数据有明显差异),用户也可根据自己样品的需求自行设定洗脱方式。
注意:由于磁珠保存液中含有减少非特异性结合的组分,在免疫诊断化学发光实验中可以直接将磁珠加入样品中使用,如果其他实验,也可以将磁珠使用前用样品缓冲液淋洗磁珠3-5次,再加入到样品中使用。
六、实验实例
6.2 链霉亲和素磁珠提取生物素化IgG
6.2.1 用户需自行准备的实验材料
6.2.1.1 PBS(0.2g KCl8.0g NaCl0.2g KH2PO4 1.15g Na2HPO4定容至1000ml pH 7.4)
6.2.1.2 生物素标记的抗体
6.2.2 预处理链霉亲和素磁珠,链霉亲和素磁珠的保存液组分比较复杂,为了避免对你的实验造成影响,磁珠使用前请
用PBS 缓冲液清洗2-3次。
6.2.3 将IgG溶解于PBS,IgG浓度大于2mg/ml 较利于筛选。
6.2.4 取100μl 处理过的链霉亲和素磁珠充分震荡混匀,置于磁力架上,磁液分离后,移上清,该过程尽量不要触碰到磁珠团。
6.2.5 移液枪移取500μL PBS重悬淋洗磁珠,放于磁力架,磁液分离后,移除上清,重复洗两次。
6.2.6 采用PBS重悬磁珠,使磁珠恢复到最初的浓度10mg/ml。
6.2.7 加入步骤2.3的IgG到磁珠管内,室温震荡反应30min,保持磁珠处于悬浮状态,以达到好的结合效率。
6.2.8 放于磁力架,磁液分离后,用移液器小心将上清移至一干净离心管内。注:该步上清可以用来检测未结合到链霉亲和素磁珠上的IgG浓度。
6.2.9 加入1mL PBS重悬淋洗磁珠,放于磁力架,磁液分离后,移除上清,重复淋洗两次。
6.2.10 选择合适的洗脱方式。
6.3 产品对比测试实验:(ALP检测体系数据,所以背景值会略高)
磁珠工作浓度2mg/ml,30μL磁珠,全自动化学发光检测仪,项目保密 |
| 浓度 | 参考磁珠 | 待检磁珠 |
校准品 | μIU/ml | 批号:60506,300nm,老工艺 | 批号:70302-3,300nm,新工艺(货号:BMSA300-2) | 批号:70310-1,1μm,新工艺(货号:BMSA1000-2) | 批号:70310-2,2.8μm,新工艺(货号:BMSA2800-2) |
20170302-A | 0 | 13442 | 12116 | 16734 | 7082 |
20170302-B | 0.15 | 31641 | 50349 | 39419 | 11248 |
20170302-C | 0.50 | 109735 | 211814 | 181132 | 15927 |
20170302-D | 1.50 | 316762 | 619656 | 437829 | 44089 |
20170302-E | 5.00 | 885750 | 1704938 | 1265651 | 127621 |
20170302-F | 40.00 | 2321896 | 3983771 | 3304586 | 379729 |
B/A | ┄ | 2.35 | 4.16 | 2.36 | 1.59 |
F/A | ┄ | 172.74 | 328.80 | 197.48 | 53.62 |
R | ┄ | 0.999959 | 0.999922 | 0.999542 | 0.998915 |
以上百迈格生物300nm、1μm、2.8μm羧基磁珠新工艺偶联链霉亲和素蛋白(罗氏)进行化学发光免疫发光检测数据,未经允许,禁止转载使用。 |
6.4 链霉亲和素磁珠在电化学发光免疫诊断(IVD)的实验数据:(2.8μm产品推广)
TSH Ag(μIU/mL) | 美国罗某链霉亲和素磁珠2.8μm (0.72mg/mL) | 美国罗某链霉亲和素磁珠2.8μm (0.72mg/mL) | 百迈格生物链霉亲和素磁珠2.8μm(0.5mg/mL) | 百迈格生物链霉亲和素磁珠2.8μm(0.72mg/mL) |
0.005 | 648.6 | 648.9 | 655.7 | 692.6 |
0.035 | 999.4 | 984.6 | 968.6 | 974.1 |
1.13 | 14562 | 14508 | 13757 | 14012 |
3.53 | 43883 | 45001 | 42503 | 43161 |
15.21 | 185988 | 187023 | 172101 | 185074 |
249 | 3.08E+06 | 3.08E+06 | 3.07E+06 | 3.11E+06 |
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以上为数据为百迈格生物2.8μm链霉亲和素磁珠和美国Roch链霉亲和素磁珠在TSH项目做的电化学发光检测原始数据,未经允许,禁止转载使用。(货号:BMSA2800-2) |
六、订购信息:(如需其他粒径敬请沟通。)
引用文献:
● Self-assembled poly-HRP dual signal amplification strategy for highsensitive detection of circulating miR-142-3p in human serum;Sensors & Actuators: B. Chemical 279 (2019) 440–446
● Dual signal amplification strategy for high-sensitivity detection of copper species inbio-samples with a tunable dynamic range.Chemical Communications (Cambridge, England) [01 Mar 2018, 54(20):2542-2545]
● Magnetic-assisted self-assembled aptamer/protein hybrid probes for efficient capture and rapid detection of cancer cells in whole blood.Talanta.2019 Dec 1;205:120129. doi: 10.1016/j.talanta.2019.120129. Epub 2019 Jul 8
● a novel cell-assisted enhanced chemiluminescence strategy for rapid and label-free detection of tumor cells in whole blood.[2020][acs sens](DOI:10.1021/acssensors.9b02140)
● Building an anti-interfering DNAzyme-powered micromachine resistant to being inhibited by biological matrices. Chemical Communications 2020, 56 (17), 2658-2661.
● A digital immuno-PCR assay for simultaneous determination of 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine in human serum
https://doi.org/10.1016/j.aca.2021.339321
●Universal DNAzyme Walkers-Triggered CRISPR Cas12a/Cas13a Bioassay for the Synchronous Detection of Two Exosomal Proteins and Its Application in Intelligent Diagnosis of Cancer