1. 简介
Protein L磁珠是由超顺磁四氧化三铁磁珠和重组大消化链球菌蛋白（Recombinant Peptostreptococcus magnus Protein L，简称r-PPL）共价键偶连，后期经过封闭处理，大消化链球菌蛋白L（PPL）能与抗体的κ轻链结合而不会影响抗体的抗原结合位点，这一特性使其与结合抗体Fc区域的蛋白A、蛋白G相比，能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体。如人类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ轻链（人类1、3、4型，小鼠1型）的Fab、scFv等抗体片段。但不能与重链、λ轻链、κ轻链（2型）结合，所以重组蛋白L磁珠不能纯化牛、山羊、绵羊、鸡来源的抗体。
天然的Protein L由719个氨基酸组成，不含二硫键，是一个酸性的分子PI 4，Protein L主要与轻链的Kappa 区域有亲和力，且对不同的IgG，IgM，IgA，IgE以及IgD均有亲和力，对lambda 没有亲和作用，亲和位点在轻链的I、III、IV区域。在人免疫球蛋白轻链中包含两种亚型，Lambda和Kappa，大约60%的IgG 为kappa，40% 的IgG 含有Lambda。在建立纯化方法前，**鉴定轻链的类型，选择正确磁珠（ProteinA磁珠/ProteinG磁珠/ProteinAG磁珠/ProteinL磁珠）进行分离纯化。
根据下表中ProteinA/ProteinG/ProteinAG/ProteinL特异性结合抗体的能力大小来选择合适的磁珠：
种类 Species | 亚型 Antibody Class | 蛋白A Protein A | 蛋白G Protein G | 蛋白L Protein L |
人 Human | IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab | +++ +++ + +++ + - + + | +++ +++ +++ +++ - - - + | +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ |
小鼠 Mouse | IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM | + +++ +++ +++ - | ++ +++ +++ +++ - | +++ +++ +++ +++ +++ |
大鼠 Rat | IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c | + - - +++ | ++ +++ + +++ | +++ +++ +++ +++ |
牛 Cow | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ | - - |
山羊 Goat | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ | - - |
马 Horse | IgG(ab) IgG(c) IgG(T) | + + - | - - +++ | NA NA NA |
兔Rabbit | IgG | +++ | +++ | + |
猪Pig | IgG | +++ | + | +++ |
狗Dog | IgG | +++ | + | NA |
鸡Chicken | IgY | - | - | - |
注：-表示不结合；+表示微弱结合；++表示中等结合；+++表示很强结合；NA表示暂无数据。能用于亲和纯化的抗体一般需要中等以上的结合力。
2、产品参数
Volume : 10mg MagBeads suspended in 1 ml solution of 1%BSA and 20% ethanol
Property | Protein L Silica MagBeads |
Matrix | Magnetic Silica |
Bead Size (mean) Ligand | 1.5μm Recombinant Protein AG |
Binding Capacity | >120 mg human IgG/g medium |
pH Stability | 3-9 (long term) |
3、试剂配制
缓冲液 | 推荐配方（自备） |
Binding buffer | 50 mM Tris, 150 mM NaCl, 0.1%-0.5% Triton 100 or Tween 20, pH 7.5 |
Wash buffer | 50 mM Tris, 150 mM NaCl, 0.1%-0.5% Triton 100 or Tween 20, pH 7.5 |
Elution buffer | 0.1M Glycine， 0.1%-0.5% Triton 100 or Tween 20, pH 3.0(or 0.1 M citric acid, 0.1%-0.5% Triton 100 or Tween 20, pH 3.0) |
Neutralize buffer | 1 M Tris, pH 8.0 |
4、操作步骤
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